每種微生物基本都有各自的特異性表面抗原，使用單抗偶聯(lián)各種熒光素可方便檢測各種樣品中的微生物。樣品經(jīng)熒光染色（如SYBR Green I 或其他染色劑染色）后，可用CytosSense 測定微生物含量。(高通量：>200000cell ; 粒徑：0.1-700μm) ，目前可直接檢測大腸桿菌，嗜血桿菌、沙門氏菌、結(jié)核桿菌、銅綠假單胞菌、軍團(tuán)桿菌等。在瑞士，F(xiàn)CM方法被列為標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌監(jiān)測方法。
2.1 激光檢測器配置：488nm激光器，綠/黃檢測熒光通道。
2.2 進(jìn)樣系統(tǒng)設(shè)置：使用CytoSense 檢測細(xì)菌時我們建議在樣品泵中使用特殊的管道，以盡量減少染色細(xì)胞粘附在管道上，對其他操作沒有影響。即更換下圖配件：
A） 實驗室手動染色樣品
如果樣品制備中進(jìn)行了細(xì)胞清洗，則直接上機(jī)檢測沒有影響；如果樣品沒有清洗，樣品含有游離染料，則有兩種選擇：
a）“正常使用循環(huán)鞘液”：為防止染料在鞘液中積聚，緩慢增加熒光通道中的背景信號，因此建議定期投加氯?？梢酝ㄟ^安裝加氯泵實現(xiàn)自動化，或者，我們可以安裝一個帶有流動開關(guān)的特殊過濾器（下圖），以從鞘液中去除染料。
b） 使用“非循環(huán)鞘液系統(tǒng)”：可將“受污染”的鞘液會立即從儀器中排出，無需再循環(huán)，本方案只需為鞘液提供足夠的清潔水。外置鞘液系統(tǒng)有利于保護(hù)管路和內(nèi)置的過濾系統(tǒng)，延長其使用壽命。濁度較高的樣品，藻濃度較高的樣品，也可以使用外置鞘液系統(tǒng)來運行儀器。
外置鞘液系統(tǒng)連接方式如下：（標(biāo)準(zhǔn)CytoSense即可，用戶可方便自行改裝）
非循環(huán)外置鞘液系統(tǒng)
增加配件 “細(xì)菌染色模塊”，可以自動調(diào)節(jié)鞘液。同時 “染色模塊”，可以實現(xiàn)自動染色。適用于水中微生物我的在線自動監(jiān)測。
使用方法：與正常細(xì)胞檢測一樣，沖洗、啟動和分析操作是自動化的，所有程序都在軟件中編寫。熒光染料有時需要在瓶子空了之后重新填充，定期更換氯和過濾器-取決于使用情況等，可自動運行幾個月。
※ 對于已經(jīng)擁有CytoSense的最終用戶，不需要購買另一臺CytoSense，只需加配染色模塊，對現(xiàn)有CytoSense做微小調(diào)整，以適應(yīng)與染色模塊的耦合（如電子連接和安裝不同類型的樣品泵）。
3.1 上升流系統(tǒng)和人為活動對巴西沿海地區(qū)微生物多樣性的影響(巴西里約熱內(nèi)盧聯(lián)邦大學(xué))
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利采用CytoSense對沖擊式氣體采樣器收集到的氣載細(xì)菌和參考菌株大腸桿菌進(jìn)行計數(shù)和鑒定。配置488nm激光器，550nm的高靈敏度黃光發(fā)射傳感器。同時記錄每個粒子的脈沖形狀的信號可用于估計細(xì)胞體積，并將細(xì)胞定義為不同細(xì)胞類型的特定簇。分析粒子體積通過FWS的掃描脈沖圖或SWS的掃描脈沖圖估算。 |
自動染色模塊（SM）安裝于CytoSense，可同時原位自動采樣、分析浮游植物和細(xì)菌。水樣在行船過程中持續(xù)泵入系統(tǒng)，SYBR Green I熒光染料通過小的染色容器逐滴加入樣品（V/V=1：10000），經(jīng)15min 染色反應(yīng)后自動泵入CytoSense。通過本次項目地中海海洋研究所展示了CytoSense 不僅可以檢測自發(fā)熒光的浮游植物，而且可檢測細(xì)菌、鞭毛蟲、纖毛蟲等微生物。經(jīng)過2 小時一次共七天的實驗，獲得了更多有效數(shù)據(jù)。
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