德國WALZ推出新款多功能調(diào)制葉綠素熒光儀MULTI-COLOR-PAM-Ⅱ
日期:2024-10-21 14:06:00
搭載多波長激發(fā)光源,調(diào)制模式具備完整的PAM功能,可測量PSⅡ功能性捕光截面Sigma(Ⅱ) 

非調(diào)制泵浦探針技術(shù),可監(jiān)測OEC狀態(tài)與衰減,周期-4-震蕩,類胡蘿卜素三重態(tài)能量弛豫

近日,德國WALZ公司在其網(wǎng)站正式上線其潛心研發(fā)的新款多功能調(diào)制葉綠素熒光儀MULTI-COLOR-PAM-Ⅱ。新款MULTI-COLOR-PAM-Ⅱ是一款緊湊型儀器,同時包含兩種截然不同的技術(shù):單翻轉(zhuǎn)閃光動力學(STK)和PAM技術(shù)。

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MULTI-COLOR-PAM-Ⅱ的亮點

一臺儀器兩種功能:非調(diào)制超快閃光動力學分析和多激發(fā)波長調(diào)制(PAM)應用;

? 超快時間分辨率:一套完整的快速測量組合(時間分辨率低至0.3μs),可以探測PSⅡ供體側(cè)放氧復合體Period-4震蕩和類胡蘿卜素三重態(tài)(Car-trip)的生成與能量弛豫;
? 多激發(fā)波長調(diào)制(PAM) 測量應用,可以探測PSⅡ受體側(cè)、電子傳遞鏈和光合作用光化學活性;

? 兩種技術(shù)組合使用:例如使用3 μs飽和閃光,通過PAM測量光監(jiān)測誘導熒光信號的衰減動力學。測量光頻率按對數(shù)遞減。

MULTI-COLOR-PAM-Ⅱ的新功能

高時間分辨率:新的STK探測器提供0.3 μs的時間分辨率;

時間分辨閃光響應:MULTI-COLOR-PAM-Ⅱ可以測量飽和 μs 閃光期間的熒光產(chǎn)量,并可以區(qū)分類胡蘿卜素三重態(tài)淬滅(TQ)和供體側(cè)依賴性淬滅(DQ)
高精度:為了詳細分析閃光響應,它們的時間非常精確且可重現(xiàn),閃光的形狀接近矩形,LED需要大約0.5μs才能達到完全強度。為閃光配置文件校正提供了一個特殊的例程;
極強的閃光:使用EDST發(fā)射器檢測器單元可以實現(xiàn)超過1000000 μmol 440 nm m-2 s-1的閃光強度(每μs產(chǎn)生超過1個激發(fā));
泵浦探針:具有可變暗間隔 ?t(從1μs到10ms)的雙閃實驗,允許對各種形式的淬滅進行高度靈活的弛豫測量;
周期4振蕩:高達100Hz(10ms間隔)的閃光頻率可用于閃光序列,以探測放氧復合物的S狀態(tài);
葉片測量:雖然該儀器最初是為懸浮液測量而設計的,但EDST發(fā)射器檢測器(STK-flashlamp)裝置也可以單獨用于測量植物葉片。此外,即將推出一種配置,其中兩個發(fā)射器相對于多波長發(fā)射器呈45° 角放置,這允許對葉片發(fā)出的熒光進行兩種波長的檢測;
PAM記錄中嵌入的STK:由于在快速非調(diào)制和PAM測量之間快速切換[8-10μs切換時間],ST可以放置在傳統(tǒng)測量中的任何位置,例如O-I1-I2-P或慢速動力學記錄,所得STK揭示了閃光時刻PS Ⅱ狀態(tài)的詳細信息。所有這些結(jié)合在一起,使MULTI-COLOR-PAM-Ⅱ成為一款非常全面的熒光計,允許用戶以多種不同的方式探測和監(jiān)測PS Ⅱ和光合電子傳遞鏈。

Multi-Color-PAM-Ⅱ的重要升級

? 在多激發(fā)波長(PAM)配置中,用戶可以測量與激發(fā)波長相關(guān)的有效PSⅡ天線尺寸信息:Sigma(Ⅱ)、PS Ⅱ受體側(cè)的反應(QA-再氧化)和沿電子傳遞鏈的電子流(O-I1-I2-P/OJIP瞬變),還可以進行飽和脈沖淬滅分析、誘導曲線和暗弛豫曲線, 以及光響應曲線,所有這些都適用于5種不同的激發(fā)和測量光波長(440、480、540、590、625 nm)以及可以任意組合應用的白光。這樣做的好處是,例如,使用硅藻作為研究對象的人可以在綠色中激發(fā)這些生物,在藍藻的情況下,可以選擇625 nm來激發(fā)藻膽體或440 nm來激發(fā)核心天線的葉綠素;

? MULTI-COLOR-PAM-Ⅱ的高靈敏度允許使對薄的樣品進行測量,即在沒有光質(zhì)和光強梯度的情況下測量樣品,在很大程度上避免了波長依賴性的熒光重吸收;
? 使用濾光片自由選擇檢測波長,例如,能夠檢測熒光λ>700 nm,富含PSI熒光F(I)和λ< 710 nm,富含PSⅡ熒光F(Ⅱ),可以在相同條件下同時測量;
? 通過比較PAM和閃光動力學(STK)測量來表征給定樣品的相同狀態(tài);

? 創(chuàng)建Trigger和Script文件可以進行自定義實驗程序測量,充分發(fā)揮用戶自主設計實驗的創(chuàng)造力。

Multi-Color-PAM-Ⅱ的應用實例

來自三個應用領(lǐng)域的示例實驗

MULTI-COLOR-PAM-II的應用程序分為3個部分:

1. 光合活性相關(guān)的應用,如誘導曲線,誘導+暗弛豫曲線和光曲線自動程序,或手動測量。

2. 基于腳本的應用,如O-I1-I2-P/OJIP瞬變、單周轉(zhuǎn)閃光后QA-的再氧化動力學、Sigma(II)測定。

3. 基于ST閃光的實驗,如周期4振蕩、類胡蘿卜素三重態(tài)誘導和衰減動力學,P680+

前兩部分代表PAM應用,最后一部分代表單周轉(zhuǎn)動力學(STK)應用。

光曲線/淬滅分析

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上圖是測量PS II互補量子產(chǎn)率Y(II)+Y(NPQ)+Y(NO)=1的光曲線示例。由于記憶效應,光強減弱時誘導的動力學可能與光強增強時不同。這種現(xiàn)象被稱為滯后。這里觀察到的光誘導Y(II)降低和Y(NPQ)升高的完全可逆性是生理健康樣品的特征。

測量快速動力學(PAM)

通過兩個不同波長測量的O-I1-I2-P瞬變

PAM快相應用的一個例子是同時測量兩個不同波長的O-I1-I2-P瞬變:在波長<710 nm處測得的熒光主要是PSⅡ熒光,而>700 n處的熒光則是PSⅡ和PSI熒光的混合熒光。該結(jié)果是由Klughammer等人(2024年)對小球藻細胞稀釋懸浮液(440nm ML和MT)的測量首次發(fā)現(xiàn)的。

圖224102101.jpg

兩種波長的O-I1上升(曲線歸一化為I1)相同。I2和P之間存在差異:與F<710nm相比,在 F>700nm時,I2-P上升更明顯。

下圖是使用雙波長葉片配置,通過440 nm測量光和光化光測量大麥葉片的結(jié)果。

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這兩項測量結(jié)果再次歸一化為I1(所有QA均已還原)。同樣,與F<710nm相比,F(xiàn)>700nm處的I2-P上升更為明顯。O-I1的上升動力學稍慢,這反映出 F<710nm波長處的自吸收比F>700nm波長處高,因此F>700nm波長處來自葉片相對較深的層,那里的有效輻射光強度較低。

功能性捕光截面Sigma(Ⅱ) 測量

參數(shù)Sigma(II)反映了PSⅡ捕光天線的有效截面。Sigma(Ⅱ)的測定(及其波長依賴性)是另一種PAM快速動力學測量的應用。有三個標準可以用來判斷用于 Sigma(Ⅱ)測定的O-I1擬合是否良好:1. 擬合應能很好地描述熒光的上升;2. 得到的擬合參數(shù)應與生理相關(guān);3. 獲得的Sigma(Ⅱ)值應與光照強度無關(guān)。在這里,觀察到Sigma(Ⅱ)值隨著所用培養(yǎng)物的階段而增加。

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在這個實驗中,連通性參數(shù)J被固定為1.2,這是Anne和Pierre Joliot在1964年獲得的值。該數(shù)據(jù)集顯示了近乎完美的擬合、合理的參數(shù)值,本質(zhì)上是高光強度下光強度的獨立性,產(chǎn)生了定義明確的O-I1動力學。

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單周轉(zhuǎn)閃動力學STK應用

類胡蘿卜素三重態(tài)衰減

下圖顯示了一組測量值,根據(jù)這些測量值可以確定類胡蘿卜素三重態(tài)衰變動力學。該數(shù)據(jù)集說明了閃光時間的精度,以及閃光燈提供兩次相隔1μs的相同強度閃光的能力。

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閃光長度和熒光誘導

另一個案例是雙閃實驗,其中第一次閃光的長度是變化的,第二次閃光是在第一次閃光40微秒后進行的。

閃光序列和閃光模式可以告訴我們一些有關(guān)S態(tài)的信息,即供體側(cè)錳簇的氧化還原態(tài)。它們還能告訴我們不同強度的遠紅外光的影響。

周期-4 振蕩

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軟件可自動得出 Fo、Fm 或 Fv水平的周期-4 振蕩(圖摘自Klughammer等人,2024年)。

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在咖啡葉片中,F(xiàn)R1照明已導致可變熒光中的周期-4 振蕩受到強烈抑制。在這種情況下,MULTI-COLOR-PAM-II可以將有效的FR強度進一步降低到FR1的10%,這就大大降低了對咖啡葉S態(tài)的影響。

STK和PAM組合測量

下一個案例展示了如何通過STK和PAM測量光的組合,將精確、高強度和短時間的STK和PAM測量光結(jié)合起來,以監(jiān)測黑暗中的熒光衰減。

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在PAM測量中,對受DCMU抑制(藍色)或未受抑制(紅色)的稀釋小球藻樣本施加3 μs STK閃光。從閃光后100 μs開始,ML頻率從100 kHz對數(shù)下降到10 kHz(圖摘自Klughammer等人,2024年)。

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